操作高灵敏elisa试剂盒要注意哪些问题？
正确操作是检验实验的标准,所以我们每一个步骤都至光重要,不可忽视,因为这关系到实验成功的关键是否.为了更好的进行高灵敏elisa试剂盒实验,下面给大家介绍一下操作高灵敏elisa试剂盒要注意那些问题.
1 吸取液体时速度不易太快,以免产生气泡,吸取的量不够准.
2 手工洗板时每次加入洗涤液后.应静置15～30s,不要将一个酶标孑L中的洗涤液溅入另一酶标孔中,防止交叉污染.甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干.
3 底物为TMB,避免与皮肤相接触.终止液为2tool的浓硫酸具有腐蚀性,应尽量避免接触皮肤.
4 加样后及时放人孵箱,标本较多时,要分批操作.按说明步骤严格控制操作时间,防止孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底.
5 作时必须戴手套,穿工作衣,严格执行消毒隔离制度.
6 剩余样品及废弃物应经121℃高压蒸汽灭菌30分钟,或用5 0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃.
7 同批号试剂组分不得混用.
8 洗涤时各孔均需加满液体,防止孔口有游离酶不能洗净.
9 每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是zui后加底物溶液及2N H2SO4.测量时先用此孔调OD值至零.
10 要确保微量加样器的准确性,可以使用蒸馏水和电子天平进行确定（由于蒸馏水不含杂质,温度环境为20%左右时,lmL的水可以看作是lg 200 L的水可以看作是0 2g）每一把微量加样器都应该将其zui高量程和zui低量程进行确定.
11 在使用微量加样器时,吸取不同瓶子中液体后要更换枪头,即使吸取标准品溶液.
12 检验技师应具备从事实验室操作的基本素质和实践经验.能熟练操作实验仪器 器械,具有一定总结和分析问题的能力,对实验中出现的意外情况能及时妥善解决.
13 操作前仔细阅读说明书,严格按照说明书要求进行规范化操作.不同批号的试剂不可混用.值得改进的地方,反复试验确定成立后才能改进,比如洗板次数的掌握等.
14 评估试剂的实用性,试剂的稳定与否,对准确率的高低到头重要.在试剂启用前,应进行阴 阳对照及样品反复比照试验,判定试剂符合要求后方可使用.
15 加样要准确 快速.加样不准确,酶生成物的量不能确定,直接影响显色结果.另外,显色的深浅及A值的测定与加入显色剂和终止液的量有关,所以加样应慎重.要求在一定时间内加样完毕的实验,如果加样迟缓,便出现误差,而且试剂长时间暴露在外,尤其室温过高时,保存期会缩短甚至失效.
16 使用校对过的微量移液器,排除自然误差.移液器准确与否对定量检测尤为重要
17 严格掌握显色时间,显色时间过短,加入终止液反应终止后,底物结合物的量过少,易出现假阴性.超过显色要求时间后显色,应判为假阳性,这可能与试剂本身有关.加显色剂后立即显色,不可报阳性,这可能是本底显色的结果.
18 洗涤彻底,洗板不彻底,酶结合物本底显色会呈现假阳性.另外,洗涤液要新鲜,现用现配,陈旧的洗涤液会出现本底增高现象,也可能出现假阳性.
19 严控反应时间,反应时间过长,酶失活；反应时间过短,酶结合物不能与血清中的微生物抗原抗体充分结合,生成物结构松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假阴性.
20 ELISA检测操作步骤复杂,可强各环节的质量控制,才能得到准确可靠的检测结果.（内容仅供参考,如有问题请来电咨询,我们会竭诚为您服务）
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