1、问：做间接Elisa法测试小鼠血清中的IgE抗体，设空白对照、和阴性对照、阳性血清稀释倍数为5千、1万、10万、20万不等，用的是生物素标记的羊抗鼠IgE抗体， 和亲和素的辣根过氧化物酶。可是结果除了空白对照孔没有颜色外，其余各孔全有颜色，而且OD值都相差不大，为什么? 

回答：可能原因如下：

(1) 水质被金属离子等污染;防止办法尽量使用新鲜水或蒸馏水。

(2) 洗涤不充分，样品中其它成分残留或酶残留;防止办法洗涤液应注满微孔，充分洗涤。

(3) 移液头重复使用，未洗净或消毒不完全; 防止办法移液头要一次性使用。

(4) 酶标板灵敏度过高。 

(5) 一抗显色时间的控制等等，关于ELISA的每一步都要注意才行。

 2、ELISA加样时的防错小经验 

(1)用一张写满字的纸，字越多越好，比如报纸，垫在下面，这样，加过标本的小孔看过去下面的字会变小，没加的字正常，非常容易区分。

 (2)可以利用液面反光与没有加的孔加以区别

 (3)在标本加完后，再把加样枪全压下，使液面产生小气泡，也可以加以区分

 3、棋盘试验的操作方法: 

(1)将抗原按一定的梯度倍比稀释后，按照ELISA从上到下(或者从左到右)的顺序包被。

 (2)将抗体按一定的梯度倍比稀释后按照ELISA从左到右或者从上到下加入。

 (3)二抗的稀释倍数是一定的，然后显色，读值。

OD值的测定时，波长要根据显色剂的不同而定，一般上大家都使用TMB显色，450nm读值。根据读值得结果可以选定合适的抗原和抗体效价，这就是棋盘实验的目 的，如果抗原包被量已知而二抗的工作浓度不确定的话就用一抗和二抗作棋盘试验。