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细胞铺板如何才能铺得均匀?

做 cell biology 实验,细胞铺板大概是很常见的一个实验了。但是有很多人不是很得要领,铺得不是均匀: 要么中间密周围稀,要么周围密中间秃顶。在这里分享一些 一些技巧: 


1、一般96孔板每孔是加100微升细胞悬液,从孔的左边靠近底部加入,加完半边板后,将未加的细胞悬液混一下再,继续加剩余的半边板子,都加完后盖上盖子,左手轻轻扶住板的左边,右手轻轻敲击板的右边缘,注意把握力度(一般轻巧敲三下),太强或次数太多会导致细胞集中成堆,将板顺时针旋转(逆时针效果不好),依次敲击剩余三个边,静置约5分钟,放入37度培养箱。


2、细胞悬液加完后,将细胞培养板抬高,对着灯光,从底部往上看,看细胞有没有抱团。然后从底部敲击,使之分散。

 

3、如果实验室有平板振荡器的话,建议用这个仪器稍振荡一下,效果不错,就是振幅小,频率高的那种。 


4、细胞要尽量打散,大部分呈单个状态。离心后,要充分悬浮!还有转移到六孔板后,是要晃得!晃的时候不要让那个细胞液转圈,不然细胞就全被带到中间去了, 就会不均匀! 


5、一瓶细胞长满后,正常处理,在培养瓶里吹匀,然后铺6孔板,每孔2毫升,铺完之后不用观察直接用酒精棉擦拭,然后放到培养箱里,轻微的左三圈 右三圈 前三圈 后三圈。基本上24小时之后观察 每孔的细胞都会很均匀。


6、计算好所需要的全部液体量和细胞量,混匀后,加到六孔板里,六孔板按横8字型晃,显微镜下观察,如果不均匀,按上述方法再晃。如果细胞未计数直接种的话, 在种六孔板的过程中,随时晃一下混匀用的瓶子,瓶子我通常是顺时针或逆时针转圈。 


7、放在水平板面上先上下移动,再左右移动,每个方向5到6次,但关键的是摇完后直接放入培养箱中,不要再做过多的运动,例如放到镜下去看,否则很容易就又聚到中间去了