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技术支持
试剂盒常见问题解答

胶回收常见问题及对策


1. 没有回收到DNA片段
如在洗脱后,发现洗脱液中没有DNA 片段,请检查是否按瓶身标签,在洗涤液中加入了无水乙醇。
 

2. 提取率低
1) 融胶液为酸性缓冲液,如融胶后,其pH 值升高将影响提取得率。请加入0.1 倍体积的3M 乙酸钾(pH5.0)。
2) 长时间使用后没有更换的电泳缓冲液,其pH 值较高,将影响DNA 的吸附。请更换新的电泳缓冲液后,再进行电泳,然后切胶。
3) 回收片断大小影响回收效率(见下图);
4) 在洗脱前,将洗脱液于30~60℃温浴,可提高提取效率适当延长洗脱时间可增加回收效率。
5) 正确估计胶大小,确保加入足够量的Binding Buffer;使胶完全融解;
6) 提高Binding Buffer用量可提高小片断DNA回收效率.对于<100bp的DNA片断,可加入6倍体积的Binding Buffer;

3. 吸光度测量结果问题
吸光度测量的是未知样品与调零标准之间的相对吸光度,所以请用与洗脱液体相同的液体,对测量样品进行稀释和调零。

4.如何计算提取率
1) 由于回收前样品中,往往含有非目的DNA 片段、引物、dNTP 等,所以不能用测回收前后吸光度的的方法计算回收率。
2) 可将回收前后DNA 片段一起电泳,使用凝胶成像系统拍照后,用配套的软件进行电泳条带灰度对比。
3) 注意,电泳条件及拍摄条件将对灰度对比结果造成很大影响,请仔细操作,以减小误差。

技术支持咨询电话:021-57782319, 800-820-1016
 

PCR产物回收试剂盒可能出现问题及解决方法

1. 无DNA

DNA Wash Buffer没有用无水乙醇稀释;

2. 低DNA产量

样品中加入的Binding Buffer的量太少;请按照使用说明加入足够量的Binding Buffer;若DNA片段长度小于200bp,可加入6倍体积的Binding Buffer;若DNA片段长度大于4kb,则加入3倍体积Binding Buffer后加入1倍体积的双蒸水。

3. OD值与琼脂糖凝胶中的DNA产量不相符

从柱子上洗脱下来的痕量杂质增加了A260的值;请按照标准步骤操作;另一方面,还取决于琼脂糖/EB电泳的质量.

4.  点样时样品漂出孔外

在洗涤完之后没有把柱上的乙醇完全除去;甩干空柱,然后再进行下面的洗脱步骤.

 

质粒抽提常见问题解答

1. 没有DNA被洗脱出来

没有用乙醇稀释Wash Buffer,按前面指导的方法准备DNA Wash Buffer

2. DNA产量低

a. 细胞裂解率低

只使用含有氨苄青霉素的LB或YT培养基.使用基本方案时,不要使用超过5ml的高拷贝质粒培养物.

在加入Solution‖前细胞没有充分混匀,可漩渦振荡悬浮液使之充分混匀.加入Solution‖后,延长孵育时间可获得清晰的裂解液.如果Solution‖没有盖紧,可能需要重配.可按以下准备:0.2N NaOH,1%SDS.

b. 细菌培养物生长过度或不新鲜

不要于37℃培养超过16小时,分离质粒前长时间存放培养物是不利的.

c. 使用的是低拷贝数质粒

增加培养物的体积至10ml,或使用质粒小量提取试剂盒II,培养物体积为25ml.

3. 产量中有大分子量的DNA污染

加入Solution‖后过分混和细胞裂解液,加入Solution‖后不要猛烈振荡或搖匀,可轻轻颠倒离心管几次使充分混匀

4. 光密度与琼脂糖凝胶上的DNA不符

从柱子洗脱下來的痕量杂质使A260升高;确保按操作指南中的步骤7和8洗脱柱子;另外,还依赖于琼脂糖/溴化乙锭电泳测定

5. 琼脂糖凝胶上可见RNA帶

SolutionI没有加入RNase A

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