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技术支持
常用缓冲液

                                                 

1,凝胶加样缓冲液


使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三:增大样品密度;以确保DNA均匀进入样品孔内;使样品呈现颜色,从而使加样操作更为便利,含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF2.2倍,而与琼脂糖浓度无关。以0.5×TBF作电泳液时,溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同,而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。在琼脂糖浓度为0.5%1.4%的范围内,这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。

  选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是,对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料,因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。

2各种pH值的Tris缓冲液的配制


某一特定pH值的0.05mol/L Tris缓冲液的配制:将50ml 0.1mol/L Tris碱溶液与上表所示相应体积(单位:ml)的0.1ml/L HCl混合,加水将体积调至100ml


1)温度对50mmol/L Tris·HClpH值的影响


(2)常用缓冲液的pKa

  a:三羟甲基氨基甲烷;bN-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磷酸;c3-N-吗啉代)丙磺酸;dNN’-双(2-乙磺酸)哌嗪;e2-N-吗啉代)乙磺酸。

3,温度对常用缓冲液pH的影响




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