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技术支持
实验室常用贮存液的配制
1.30%丙烯酰胺溶液
  【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之,补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,查证该溶液的pH值应不大于7.0,置棕色瓶中保存于室温。
  
  【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收,其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子,在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂(MB-1Mallinckrodt),搅拌过夜,然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间,丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。
  
  2.40%丙烯酰胺
  【配制方法】把380g丙烯酰胺(DNA测序级)和20g N,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理,但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。
  
  【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。
  
  3.放线菌素D溶液
  【配制方法】把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中,1:10稀释贮存液,用100%乙醇作空白对照读取OD440值。放线菌素D(分子量为1255)纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21,900,故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182,放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中,保存于-20℃。
  
  【注意】放线菌素D是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。
  药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度,这类制品便可用于抑制自身引导作用。
  
  4.0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液
  【配制方法】在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0,用蒸馏水定容1ml,分装成小份保存于-70℃
  
  5.10mol/L乙酸酰溶液
  【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中,加水定容至1L后过滤除菌。
  
  6.10%过硫酸铵溶液
  【配制方法】把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中,该溶液可在4℃保存数周。
  
  7.BCIP溶液
  【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐(BCIP)溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃
  
  8.2×BES缓冲盐溶液
  【配制方法】用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4,室温下用HCl调节 该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成小份,保存于-20℃。
  
  9.1mol/L CaCl2溶液
  【配制方法】在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl2?6H2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成10ml小份贮存于-20℃。
  
  【注意】制备感受态细胞时,取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml,用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,然后骤冷至0℃。
  
  10.2.5mol/L CaCl2溶液
  【配制方法】在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl2?6H2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。
  
  11.1mol/L二硫苏糖醇(DTT)溶液
  【配制方法】用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
  
  【注意】DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
  
  12.脱氧核苷三磷酸(dNTP)溶液
  【配制方法】把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右,用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节 每一dNTP溶液的pH值7.0(用pH试纸检测),把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释,在给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度,然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP,分装成小份贮存于-70℃。
  
  13.0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液
  【配制方法】在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na?2H2O),在磁力搅拌器上剧烈搅拌,用NaOH调节 溶液的pH值至8.0(约需20g NaOH颗粒)然后定容至1L,分装后高压灭菌备用。
  
  【注意】EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0,才能完全溶解。
  
  14.溴化乙锭(10mg/ml溶液)
  【配制方法】在100ml水中加入1g溴化乙锭,磁力搅拌数小时以确保其完全溶解,然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中,保存于室温。
  
  【注意】小心:溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性,使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套,称量染料时要戴面罩。
  
  15.2×HEPES缓冲盐溶液
  【配制方法】用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4?2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES,用0.5mol/l NaOH调节 pH值至7.05,再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌,分装成5ml小份,贮存于-20℃。
  
  16.IPTG溶液
  【配制方法】IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量为238.3),在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后,用蒸馏水定容至10ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。
  
  17.1mol/L乙酸镁溶液
  【配制方法】在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁,用水定容至1L过滤除菌。
  
  18.1mol/L MgCl2溶液
  【配制方法】在800ml水中溶解203.4g MgCl2?6H2O,用水定容至1L,分装成小份并高压灭菌备用。
  
  【注意】MgCl2极易潮解,应选购小瓶(如100g)试剂,启用新瓶后勿长期存放。
  
  19.β-巯基乙醇(BME)溶液
  【配制方法】一般得到的是14.4mol/L溶液,应装在棕色瓶中保存于4℃。
  
  【注意】BME或含有BME的溶液不能高压处理。
  
  20.NBT溶液
  【配制方法】把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃。
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